Tp Electrophorese

Électrophorèse de protéines et immuno-révélation But Le but du TP est de vérifier la pureté du lysozyme purifié à partir de blanc d’œuf par chromatographie. Pour cela, deux techniques d’électrophorèse ont été utilisées : SDS-PAGE et Western Blot Principe Au cours de ce TP, nous avons utilisé plusieurs méthodes d’analyse de la pureté d’une fraction. Électrophorèse : Généralités L’électrophorèse est une technique analytique basée sur le déplacement de particules chargées dans

SOMMAIRE Dans cette expérience la technique d’électrophorèse SDS-PAGE a été utilisée pour tracer la droite logarithmique du poids moléculaire en fonction de la distance de migration en utilisant comme référence deux standards qui contiennent des complexes SDS-polypeptide, puis les poids moléculaire d’inconnus ont été déterminés. Il a été trouvé que la protéine phosphorylase B est celle avec la migration la plus précise, puisque en comparant les poids moléculaires (PM) théorique et expérimental

Résultat : voir annexe 2 : tableau des valeurs obtenues et graphe graphiquement, on a obtenu un quantité de BSA dans notre échantillon A de 11,7μg. La concentration protéique dans l'échantillon A est de 11,7/20=0,575μg/μl Deuxième séance : électrophorèse SDS-PAGE en conditions dénaturantes Méthode : on cherche ici à estimer la taille des protéines présentes dans l'échantillon. Nous avons tout d'abord dénaturés notre échantillon (mélange avec du solmix et chauffage de l'échantillon) Puis on a

la réponse appropriée. Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde) PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 7.0 Érythropoïétine (solution concentrée d’) Limites : identifiez les pics dus aux isoformes 1 à 8 dans B. Electrophorèse capillaire de zone (2.2.47). l’électrophorégramme obtenu avec la solution à examiner, Solution à examiner. Diluez la préparation à examiner par comparaison avec l’électrophorégramme obtenu avec la avec de l’eau R de façon à obtenir une concentration

fractions Fn, Fm comme étant les plus riches en enzyme. - 3ème partie expérimentale : série de manipulations 3. Méthodes et résultats. Suite de l’exemple : - Activité : à partir des fractions Fn, Fm, vérifier la pureté des fractions par électrophorèse (SDS-PAGE, …), suivi d’un Western-blot/révélatioon par kit ECL+ … - Détailler la méthode : choix, principe, conditions électrophorétiques, conditions de blotting, anticorps utilisés, description du kit ECL (chimioluminescence) … - Résultats

blot lorsqu’on confirme un résultat obtenu en sérologie de routine, on utilise parfois un test dit Western blot (WB), qui est une modification du principe ElIsa énoncé plus haut. dans le test WB, les protéines d’un lysat viral sont séparées en électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PagE), ensuite transférées (« blotting ») vers une feuille de nitrocellulose ou de nylon. cette feuille, découpée en lanières, permettra de tester les sérums pour rechercher les anticorps contre les différentes protéines

la souche a été isolée sur milieu gélosé additionné de Tétracycline et d’Ampicilline. De ce milieu, les cellules d’E.coli ayant intégré le plasmide recombinant ont été sélectionnées par vérification de la présence de ce plasmide à l’aide d’une électrophorèse sur gel d’agarose (Cf. Image 1). Les pistes des colonies n° 1, 2 et 4 montrent la présence du plasmide par un spot de migration. Elles seront donc utilisées pour la surproduction de l’AAL et ensuite sa purification. II Surproduction de l’AAL

o57 DATE: GROUPE de TD: 9 CLONAGE DE MORCEAUX D'ADN DU PHAGE LAMBDA Résumé: Lors de ce TP de BIO 57, nous allons réaliser des clones de morceaux d'ADN du phage Lambda. Pour cela on utilise des vecteurs de clonages (içi un plasmide pBluescript) combinés avec notre ADN à cloner, on a donc des molécules recombinantes ,ou ADNrecombinants (vecteur + ADN lambda). Ensuite on les introduit dans des bactéries hôtes afin de les reproduire. Au final on obtient des clones d'ADN lambda avec son

travaux pratiques illustrent les cours de Biochimie de la 1ère et de la 2ème année de la Licence BB. Le coût élevé de certains appareils nous oblige à adopter une organisation par manipulations tournantes. Pour pallier le déphasage inévitable de certains TP avec le cours, un bref exposé théorique vous donne ou vous rappelle les connaissances nécessaires à la compréhension de votre manipulation. I - Conseils pour la pratique des manipulations de Biochimie I-1 Opérez avec soin et avec méthode tout en

Groupe 10 Résumé : L'objectif de ce TP est de cloner des morceaux d'ADN. Ce clonage nous permet d'obtenir le gène demandé ou bien sa protéine en grande quantité. Ce clonage est nécessaire quotidiennement (l'insuline par exemple, utilisée par de nombreuses personnes). Pour réaliser ce clonage moléculaire nous avons réalisés plusieurs étapes importantes telles que la digestion enzymatique, insertion dans un vecteur de clonage (plasmide), électrophorèse, extraction de l'ADN,... Introduction