Substrat enzymatique

Cours d'enzymologie fondamentale 1 I. Introduction à l'étude de l'enzymologie. A. Vocabulaire. Substrat : structure qui sera susceptible d'être transformée lors d'une réaction chimique (A donne B) catalysée par un enzyme pour donner un produit B. Le substrat pourra aussi être un produit. Produit : il est issu de la transformation par une enzyme. Le produit peut être un substrat pour une autre enzyme. Inhibiteur : composé reconnu par l'enzyme mais ne conduisant pas à une réaction. Effecteur

pratique est de qualifier et de quantifier la protéine majoritaire dans le blanc d'œuf : le lysozyme. Pour cela, il est tout d'abord nécessaire de la purifier à l'aide d'une chromatographie échangeuse d'ions. Ainsi, on pourra mesurer l'activité enzymatique et doser les protéines présentes. PRINCIPE Chromatographie échangeuse d'ions La chromatographie est une méthode d'analyse physico-chimique de séparation. Les constituants d'un mélange se séparent le long d'une phase stationnaire par

d'abord oxydé en pyruvate sous l'action de la lactate déshydrogénase. On obtient la réaction suivante : CH3-CHOH-COO- + NAD+ ¬¾® CH3-CO-COO- + NADH,H+ Le pyruvate est ensuite oxydé en acétyl-CoA. Cette réaction est catalyse par le complexe multi-enzymatique de la pyruvate déshydrogénase (complexe PDH) constitué de 3 enzymes principales. La pyruvate déshydrogénase (Enzyme E1), ayant la thiamine pyrophosphate (TPP) comme groupement prosthétique assure la décarboxylation du pyruvate et le transfert du

II . La spécificité enzymatique Chaque enzyme n’exerce son action que sur un type de molécules, que l’on nomme substrat. Sur son substrat, chaque enzyme ne catalyse qu’un seul type de réactions chimiques. Chaque enzyme est caractérisée par une double spécificité d’actions et de substrat. III. Le mode d’action. 1) complexe enzyme substrat : L’action enzymatique de déroule en 2 étapes : -formation d’un complexe entre l’enzyme et le substrat, lié à une complémentarité de formes

Chapitre 2: Cinétique enzymatique. 1. Mesure des vitesses. 1.1 Méthodes (ou systèmes) discontinues. Calcul de la vitesse de transformation d'un substrat sous l'action d'une enzyme. 1. Plusieurs mesures, la première le plus tôt possible de S et de P et on regarde ensuite graphiquement la variation des concentrations. La concentration varie linéairement. Il faut être sûr d'avoir des vitesses initiales. 2. Injection dans une colonne de chromatographie les prélèvements, le chromatogramme donne l'absorbance

Influence de la concentration en enzyme----------------------------------17 VI. Influence de la concentration en substrat et détermination du type d’inhibition---------------------------------------------------------------------20 VII. Influence du pH sur la réaction enzymatique------------------------------24 VIII. Influence de la température sur la réaction enzymatique ----------------26 A. Détermination de la température optimale--------------------------26 B. Etude de la dénat

protéines. Les protéines enzymatiques sont des catalyseurs, c’est-à-dire qu’en agissant à des concentrations très petites, elles augmentent la vitesse des réactions chimiques, sans en modifier le résultat. A la fin de la réaction la structure de l’enzyme se retrouve inchangée. • Une enzyme donnée est spécifique d’une réaction, c’est-à-dire qu’elle catalyse toujours la même transformation, se produisant sur les mêmes corps chimiques initiaux. • Les protéines enzymatiques sont synthétisées par des

protéine, une enzyme est définie par sa séquence polypeptidique. Une enzyme est spécifique au substrat sur lequel elle agit. Les enzymes sont des biocatalyseurs, c’est-à-dire qu’elles permettent des réactions chimiques cellulaires en transformant un substrat en produit. Chaque enzyme présente une double spécificité : elle ne catalyse qu’un seul type de réaction et ne prend en charge qu’un seul type de substrat. Ainsi, la lactase intestinale ne permet que d’hydrolyser le lactose en deux glucides, le glucose

: Problème 2 : Quelles sont les deux spécificités d’une enzyme ? (Exemple de l’amylase) A- Une double spécificité enzymatique : Activité 2 : Les spécificités d’une enzyme Une enzyme agit toujours sur le même substrat. Par exemple, l’amylase ne peut agir que sur l’amidon. On parle alors de spécificité de substrat. Une enzyme catalyse toujours la même réaction sur son substrat spécifique. Par exemple, l’amylase ne peut catalyser qu’une réaction d’hydrolyse sur l’amidon. On parle alors de spécificité

judicieux des milieux et des divers substrats Préparation standardisée et mise au point minutieuse des modalités techniques Traitement numérique des résultats avec obtention d’un code Traitement informatique des résultats 3) Principe des méthodes standardisées (galeries d’identification) Microméthodes classiques Premières commercialisées Plus utilisées Exploitent les réactions biochimiques consacrées Ex : Entérotubes, API 20E, API 20A, API staph Microméthodes enzymatiques Réactions originales mise au point