Substrat enzymatique

forme une forte interaction avec les deux bases et l’axe de l’ARN - Les cycles III et IV créent de faibles contacts Mécanismes de résistance aux aminosides • Altération de la cible ribosomale • Défaut de pénétration • Efflux • Modification enzymatique • Piégeage de l’antibiotique Altération de la cible (I) Mutations • Protéine ribosomale Protéine S12 → Streptomycine Protéine S5 → Spectinomycine Protéine L6 → Gentamicine • ARN ribosomal A523 → C Streptomycine C912 → U C1192 → U Spectinomycine

Ce logiciel permet d'observer, à travers l'exemple de la lactase, les conséquences des variations de température, pH, concentration en substrat ou en enzyme sur la formation du produit lors d'une réaction enzymatique. L'agitation thermique des molécules, la charge des protéines en fonction du pH, et la dénaturation de ces dernières sont modélisées. En changeant un paramètre on peut établir l'optimum pour le fonctionnement de cette enzyme. - pH : Chaque enzyme a un pH optimum d'activité. En deçà

l'histidine Réalisation d'une solution tampon 4 5 Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne 6-9 Cinétique enzymatique Bases de cinétique enzymatique Etude de la β Galactosidase 10 – 11 11 - 13 Modèles moléculaires 14 – 17 Annexes à détacher et à inclure ans le compte rendu : Tableau cinétique enzymatique Tableau chromatographie d’exclusion -1- TP Biochimie LV 232 – Année 2009 - 2010 ANNEXE (à lire impérativement avant les TP) SPECTROMÉTRIE

solvant Voir feuille annexe pour les calculs Quelles sont les différences entre hydrolyse chimique et enzymatique ? 100°C, H2SO4, 15 minutes L’acide est le catalyseur chimique C12H22O11 + H2O C6H12O6 + C6H12O6 37°C, invertase, 2 minutes ici le catalyseur est un extrait de matière vivante : c’est un catalyseur biochimique = enzyme On remarque qu’une hydrolyse enzymatique demande moins d’énergie (temps et chaleur), est beaucoup plus rapide et nécessite des conditions opératoires

4- voie rectale - pas d’EPP au niveau inférieur - EPPH niveau sup, son importance dépend du niveau de résorption rectale Caractéristiques de l’EPP : - n’intéresse que les mol subissant les biotransformations - met en jeu des réactions enzymatiques - peut être simple, double ou triple - n’est pas tjrs défavorable car formation de métabolites actifs - est difficilement prévisible Les facteurs influençant l’EPP - âge - pathologie - médicaments associés - alimentation La biodisponibilité

[fractions E1-E6]. II MESURE DE L'ACTIVITE ENZYMATIQUE DU LYSOZYME 1) Matériel et produits - spectrophotomètre et enregistreur - tampon phosphate 0,1 M pH 7,0 - cuves 3 mL et agitateurs plastique - NaCl 0,15 M - pipettes automatiques 20, 200 µL, 1 et 5 mL - solution de lysozyme à 150 µg/mL, dans NaCl 0,15 M - suspension de membranes de Micrococcus Lysodeikticus à 0,3 mg/mL dans le tampon phosphate 2) Mode opératoire L'activité enzymatique des échantillons est déterminée grâce la propriété

le facteur variable. On fait varier le pH du mélange d’amidon – amylase à l’aide d’acide chlorhydrique qui fait diminuer le ph à environ 4. Conclusion : L’acidité modifie la réaction enzymatique. Cependant il existe d’autres facteurs peuvent favoriser ou entraver la formation de complexes enzyme-substrat ; tubes Conditions/enzymes Test eau iodée Test liqueur de Fehling 3b Glaçon - 0°C Jaune (un peu d’amidon) Rouge/bleue (très peu de glucose) 3c Pepsine Noire Bleue (pas de sucre)

minoritaire par rapport la couverture énergétique et chimique réalisée par le secteur pétrolier. Ceci est du essentiellement au fait que seule une partie de la plante est exploitable (problèmes d’obtention de sucres fermentescibles par hydrolyse enzymatique et chimique confondu) aboutissant à des rendements jusqu’à ce jours faibles. La biomasse provient de l'accumulation des produits de la photosynthèse dans les végétaux au cours de leur vie. Le bois est la principale source de biomasse (combustion)

actif. Zonz restreinte, tri dilensionel. Fixation au substrat par des liaisons faibles pour que le produit de la réaction puise partir. Des éléments poisons peuvent lier des laisons covalentes et tuer. L'enzyme est toujours prete a travailler. Spécificité du substrat est lié a l'arangemetndes atomes ( modèle clef serrure. c) catalyse biologique L'enzyme va diminuer l'énergie libre d'activation de la réaction. Va abaiser l'énergie du substrat pour lui permettre de franchir le mur énergetique. Augmente

ces enzymes pour les deux types de plantes. Nous démontrerons par la suite la production chez les végétaux de dioxygène par les mécanismes de la photosynthèse. I. Catalase et peroxydase Ces manipulations portent sur la comparaison de l’activité enzymatique de la catalse et la peroxydase chez deux plantes, le blé et le maïs qui appartiennent respectivement au type C3 et C4. Lors de la photosynthèse pour les plantes en C3 (quant la lumière et la température sont élevées) il y a un phénomène de photorespiration