Trypsine

826074803 0.7 2.5 Ovalbumine 4,633468456 1.2 3.6 Anhydrase Carbonique 4,477121255 2 5.1 Inhibiteur Trypsine 4,303196057 3 α-lactalbumine 4,158362492 3.9 La première chose que l'on peut constater c'est qu'en utilisant le gel à une concentration de 10% de polyacrylamide, deux molécules du marqueur sont sorties du gel, là où pour le gel à 15% elles étaient restées. Il s'agit de l'inhibiteur de Trypsine (20100 Da) et de l' α-lactalbumine (14400 Da). Le gel à 10% n'est donc pas adapté si l'on désire se

été répétée 3 fois. 5°) Nous avons réalisé par la suite, la prétrypsination dans 7mL de solution d’Earle à 1% de trypsine à 0.125% et 1% d’EDTA à 0.02%, pendant 5 minutes (élimination des cellules sanguines). 6°) Après avoir laissé décanter la préparation, nous avons procédé à la Trypsination qui consiste à ôter le surnageant et le remplacer par une quantité égale de 7mL de trypsine à 0.125% et 1% d’EDTA à 0.02%, 30 à 60 minutes sous agitation lente jusqu’à disparition complète des fragments de

réaction étant de 100 µmol/min et Km avec une valeur de 2mM, quelle sera la valeur de la vitesse de la réaction quand [S]= 2µM et 2M ? en déduire la zone qui délimitera les différents types d’ordre cinétique enzymatique. 3) L’étude de l’activité de la trypsine sur la carbobenzoxylysine par-nitrophényl ester est suivie par mesure de la variation de la D.O. due à la libération du paranitrophénol. Temps (secondes) 24 48 72 96 120 168 240 312 450 600 D.O. 0,41 0,74 1 1,2 1,37 1,6 1,8 1,9

monosaccharide, qui sont absorbés par l’enterocyte et gagnent le système porte. Les glucides non absorbés sont hydrolysés dans le colon par fermentation. 2) protides apport quotidien = 100g:jr La pepsine gastrique et les protéases pancréatiques (trypsine, chymotrypsine) dissocient les polypeptides en oligopeptides. Ceux-ci sont sont hydrolysés en di-peptides et en acides aminés par l’aminopeptidase de la bordure en brosse de l’entérocyte. Les acides aminés gagnent la veine porte. Les proteines ayant

correspond à l'ensemble des acides aminés formant le site de fixation du substrat, du coenzyme, du cofacteur et du site catalytique. -Activation du proenzyme : proenzyme ( inactif) ==(protéolyse limitée )==> enzyme (actif ) ex: trypsinogène===>trypsine -Site de fixation du substrat Reconnaissance enzyme substrat, il y a complémentarité entre les deux (complémentarité structurale ) En général il y a un site de fixation de substrat par enzyme monomérique et un site de fixation par protomère pour

l'hydrolyse d'un disaccharide différent. Dans l'estomac, la pepsine prépare les protéines à la digestion en les morcelant, puis un groupe d'enzymes de l'intestin grêle décompose complètement les polypeptides en leurs composants, les acides aminés. La trypsine et la chymotrypsine agissent spécifiquement sur les liaisons peptidiques entre certains acides aminés; par conséquent, comme la pepsine, elles décomposent les polypeptides en chaînes plus courtes. Les carboxypeptidases (A et B) enlèvent un acide

|Hydrolyse | |Amylase salivaire |Amidon |Hydrolyse | |Pepsine |Protéines |Hydrolyse | |Trypsine |Protéines |Hydrolyse | |Chymotrypsine |Protéines |Hydrolyse | |PAH |Phénylalanine

* Techniques de purification des enzymes en quantités suffisante pour étudier leur structure. * Description mathématique de l’activité enzymatique (1902-1930). 1926 : Summer. Uréase, cristallisation. 1930 : Northrop et Künitz. Pepsine, trypsine, cristallisation. PUIS NOUVELLES TECHNIQUES 1955 : Sanger. Séquençage de l’insuline. 1957 : Kendrew. Diffraction des rayons X. Années 60. Synthèse chimique. On est alors capables de connaitre la structure des enzymes et leur fonction

concentration viable pour la survie des cellules. Les deux lignées cellulaires se sont développés dans un milieu sélectif favorable à leurs croissances (DMEM). Tous les 2 ou 3 jours les cellules sont détachées du fond de la boite de pétri grâce à de la trypsine 1x, les cellules sont ensuite observées sous microscope inversé afin d’apprécier la places prises des cellules dans le chant microscopique appelé confluence. Une dilution est donc réaliser ou non suivant la confluence obtenue, puis les cellules sont

tyrosine ou de la phénylalanine. La trypsine coupe spécifiquement les liaisons arginyl et lysyl : -Arg-Ala- -Lys-Ala- Trypsine Trypsine 2/ Les méthodes automatisées :